杨永花

(兰州市园林科学研究所730070)

垂吊矮牵牛(Petunia?Spreding)为茄科矮牵牛属的多年生蔓生植物，是近年来较为时尚的垂吊型花卉装饰植物。目前该品系主要依靠从国外引进F1代种子进行播种繁殖，但种子价格昂贵(单价2.5元/粒)，细小，播种难度大，种子繁殖又易发生变异，出现杂色，而扦插繁殖苗分枝力弱，株型单薄，严重影响其观赏价值。播种、扦插都难以在短时间内生产出批量的优质种苗。因此，采用组织培养技术进行快速繁殖，可解决繁殖系数低、种子价格昂贵等问题，从而满足市场的大量要求。

　　一、材料与方法

　　1?取材与消毒
　　在日光温室中选择生长健壮、无病虫害植株的幼嫩叶片，作为外植体材料，用自来水冲洗干净，再用蒸馏水冲洗2～3次，置于超净工作台上，先用70%的酒精浸泡10秒钟，无菌水冲洗一次，再用1‰的升汞消毒5～6分钟，无菌水冲洗4～5次，待接种。
　　2?培养基及培养条件(培养基单位mg/L)
　　试验所选用的培养基为(1)MS+6BA1+NAA0.1；(2)MS+6BA2+NAA0.2；(3)MS+6BA0.5+NAA0.1；(4)MS+KT0.5+NAA0.1；(5)1/2MS；(6)1/2MS+IBA0.1；(7)1/2MS+IBA0.2；(8)1/2MS+NAA0.03。以上培养基中均加入琼脂3.3g/L，MS中加入白糖30g/L，1/2MS中加入白糖20g/L，pH值均为5.8，培养温度(25±2)℃，光照强度1500LX～2000LX，光照时间10～12h/d。
　　3?实验方法
　　将叶片剪成1cm2大小的方块，接种在培养基(1)和(2)中，诱导愈伤组织及不定芽的形成。每处理10块叶片，待外植体萌发产生密集的不定芽丛后，分割成1cm2大小的方块，继代培养在(3)和(4)中，每处理接20块不定芽丛。培养10天后统计高于2cm的健壮幼苗，并将高于2cm的健壮幼苗剪切下来转接到(5)～(8)中进行生根，每处理接40棵幼苗，培养一周后统计幼苗生根情况。当生根试苗根系生长至1cm以上，苗高4～5cm时进行移栽。

　　二、试验结果

　　1?芽诱导分化
　　接种到培养基(2)中的叶片，培养1周后，叶片边缘开始出现淡绿色愈伤组织，叶片渐变厚并弯曲成拱形状，2周后愈伤组织上出现绿色突起(即芽点)，3周开始分化，产生密集的丛生芽，诱导率达100%。接种到培养基(1)中的叶片培养10天后，叶片边缘开始出现浅绿色愈伤组织，叶片加厚，并膨大凸起。3周后愈伤组织上出现稀少的绿色芽点，1个月后开始分化产生丛生芽，诱导率达90%。叶片在培养基(2)中比(1)中分化所需时间短，分化率高，且产生密集的丛生芽。因此，MS+6BA2+NAA0.2更适宜叶片诱导培养。
　　2?芽的增殖继代
　　继代于(3)中的叶片不定芽丛培养10天后，每块不定芽可增殖15～20个高于2cm的幼苗，但幼苗茎杆细弱，需经过壮苗培养才能转接到生根培养基中进行生根。继代于(4)中的不定芽丛培养10天后，每块不定芽均可增殖30～40个高于2cm的幼苗，且幼苗茎杆粗壮，叶片浓绿，生长势强，可直接转接到生根培养基中进行生根。因此，MS+KT0.5+NAA0.1是丛生芽增殖的最佳继代培养基。
　　3?生根培养
　　健壮幼苗在生根培养基(5)和(6)中，培养5天后开始生根，培养10天后，(5)中幼苗根细弱，每株平均有12条根，部分幼苗叶尖变白，(6)中幼苗根粗壮，平均有20条根，幼苗生长旺盛，(7)中幼苗7天开始生根，根粗短，平均只有9条根，(8)中幼苗8天开始生根，根粗短，平均有16条根，幼苗生长健壮。因此，从开始生根天数、平均根数及幼苗生长势看，1/2MS+IBA0.1为幼苗最佳生根培养基，根多而粗壮。

　　三、炼苗与移栽
　　生根苗根系长至1cm以上，株高4～5cm时即可进行炼苗移栽。移栽前先在自然条件下打开瓶口炼苗2～3天，轻取试管苗，用温水洗干净根部粘附的培养基，移栽到新的蛭石基质中，用1‰的多菌灵溶液浇湿基质，用75%的遮荫网遮荫保湿，1周后逐渐通风透光，生长适温控制在22℃左右。

　　四、小结与讨论
　　1?通过组织培养技术可快速生产出垂吊矮牵牛幼苗，解决了其种子依靠进口等问题，降低了生产成本，为大规模商业化生产种苗提供了一条捷径。生产的植株分植习性好，叶片浓绿，花色鲜艳，花期长。
　　2?在实验范围内，垂吊矮牵牛叶片诱导愈伤组织形成丛生芽的最佳培养基为MS+6BA2+NAA0.2，最佳增殖继代培养基为MS+KT0.5+NAA0.1，最佳生根培养基为1/2MS+IBA0.1。
　　3?生根试管苗根系长至1cm以上，株高4～5cm时即可炼苗移植，移栽成活率达95%以上。